分子克隆是指在生物体外，用重组技术将特定基因插入克隆载体分子中获得重组克隆载体，再通过转化或转导于适合的活体寄主内进行复制与扩增，然后从筛选好的寄主细胞内分离提纯目的克隆载体，得到插入DNA的拷贝，最终使目的基因扩增的过程。

主要包括以下几个方面：

（1）以PCR为基础的各类载体构建，如细菌表达载体，酵母表达载体，哺乳动物表达载体，穿梭质粒等；

（2）基因突变，包括定点突变，多点突变，基因缺失等；

（3）载体改造；

（4）shRNA载体、siRNA载体和miRNA表达载体的构建；

（5）双荧光素酶报告基因检测载体的构建。

1、TA克隆：总RNA（基因组DNA）的提取→引物设计及合成→以总RNA（基因组DNA）为模板通过RT-PCR（PCR）扩增得到目的基因→将PCR产物和选择好的载体连接→转化及筛选重组子→重组子测序及结果分析。

2、亚克隆：PCR产物TA克隆至带有“T”末端的载体上→将含有目的基因的质粒采用酶切方法克隆至商品化的表达载体或改造后的特殊载体上→以质粒为模板PCR扩增目的基因后再进行克隆。

3、定点突变：在指定位置进行碱基置换、插入或者缺失，制作变异导入的基因→酶消化甲基化质粒模板，选择突变质粒DNA→转化大肠杆菌，挑选转化子进行测序鉴定。

Figure4.分析克隆流程

服务说明

（1）有效的质粒（仅提供含有该质粒的菌种，提取质粒需另外收费）；

（2）真实的原始实验数据；

（3）权威可靠的实验报告：包括详细的实验说明，相关的酶切图片，测序结果

1、以标准化实验作为服务宗旨

沃登以高级的设备和技术人员作为可靠基础，不断的进行方法的开发优化，确保实验过程的可重复性，实验结果的可靠性与一致性。

2、一站式技术服务，囊括动物、病理、细胞、分子等各学科领域的检测

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3、量身定做的技术支持

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